Messbare (minimale) Resterkrankung (MRD)

Die molekulargenetische Bestimmung der MRD basiert auf dem Nachweis von leukämiespezifischen DNA-Sequenzvarianten, chromosomalen Translokationen und genomischen Rearrangements. Mit Hilfe von molekularbiologischen Untersuchungsmethoden können patientenspezifische Mutationen bei Diagnosestellung identifiziert und im Untersuchungsverlauf nachverfolgt werden.

Der molekulargenetische Nachweis der MRD beruht auf dem Funktionsprinzip der Polymerase Kettenreaktion (polymerase chain reaction, PCR). Hierbei handelt es sich um ein enzymbasiertes Verfahren zur spezifischen Vervielfältigung von Nukleinsäuresequenzen. Zu den im Rahmen der molekulargenetischen MRD-Routinediagnostik verwendeten Analyseverfahren zählen u.a.: Next Generation Sequencing (NGS) mittels Ultra-Deep Amplicon Sequencing, digitale PCR, quantitative real-time PCR (qPCR) und die Fragmentanalyse.

Ein Beispiel hierfür zeigen Patienten mit chronischer myeloischer Leukämie (CML), bei der die molekulargenetische MRD-Diagnostik einen zentralen Stellenwert bei der Steuerung der Therapie besitzt. So weisen mehr als 95% aller CML-Patienten bei Diagnose eine reziproke Chromosomentranslokation auf, die zu der Entstehung eines BCR-ABL1 Fusionsgens führt. Die Quantifizierung des hierbei gebildeten BCR-ABL1 Fusionstranskripts mittels sequenzspezifischer qPCR eignet sich für eine hochsensitive Bestimmung der MRD-Last. Ein Anstieg in der Mutationslast des BCR-ABL1 Fusionstranskripts bei CML-Patienten in kompletter molekularer Remission kann auf ein Therapieversagen hindeuten.

Weitere auf aktuellen Diagnoserichtlinien basierende (Schuurhuis et al., 2018, Döhner et al., 2017) und bei akuten Leukämien routinemäßig nachgewiesenen Mutationen zur MRD Diagnostik sind folgende:

Für eine vollständige Auflistung aller von uns angebotenen Marker verweisen wir sie auf den Zusatzbogen Molekulargenetik des Untersuchungsauftrags.

Bei akuten Leukämien sind Leukämie-assoziierte aberrante Immunphänotypen (LAIPs) nachweisbar, die in dieser Konstellation auf den Zellen des normalen Knochenmarks nicht oder nur sehr selten vorkommen. Diese werden eingeteilt in:

Von zentraler Bedeutung für die korrekte Identifizierung eines LAIP und damit für die MRD-Quantifizierung ist die genaue Kenntnis des Immunphänotyps im normalen Knochenmark und der Vergleich mit demselben. Da in vielen Fällen die Expressionsstärke eines bestimmten Antigens den LAIP charakterisiert und diese sich zwischen verschiedenen Fällen sehr unterscheidet, ist es erforderlich, für jeden Patienten einen oder mehrere LAIPs individuell zu definieren. Um die MRD-Untersuchung zu ermöglichen, ist es somit unabdingbar, zum Zeitpunkt der Diagnosestellung den LAIP individuell zu erfassen. Für die Detektion eines LAIP ist insbesondere bei der AML die Verwendung eines umfangreichen Panels von Antikörpern notwendig, um auch seltene LAIPs identifizieren und für spätere Verlaufsuntersuchungen zur Verfügung zu stellen.